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看完本文,對Bio-Rad_PTC-200 PCR儀有一個新認識
發布時間:2022-03-24   點擊次數:112次
   Bio-Rad_PTC-200 PCR儀可以根據不同的DNA的片段及其引物,設計不同的擴增條件,從而實現樣本DNA在Taq酶的作用下達到指數性的增長。廣泛應用于序列測定、遺傳分析、醫療診斷等樣品的前處理。
  
  PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。PCR儀實際就是一個溫控設備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進行溫度控制。PCR擴增儀又稱為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀,是利用PCR(Polymerasechainreaction,聚合酶鏈反應)技術對特定DNA擴增的一種儀器設備,被廣泛運用于醫學、生物學實驗室中,例如用于判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定等。
  
  Bio-Rad_PTC-200 PCR儀反應步驟:
  分別是:1.Denaturation2.Annealingofprimers,3.Extensionofprimers。所謂Denaturing乃是將DNA加熱(至90~95℃)變性,將雙股的DNA加熱后轉為單股DNA以做為復制的模板.而Annealing則是令Primers于一定的溫度下(冷卻至55~60℃)附著于模板DNA兩端。最后在DNA聚合酶e.g.Taq-polymerase的作用下(加熱至70~75℃)進行引物的延長Extensionofprimers及另一股的合成。
  
  PCR的最早設想核酸研究已有100多年的歷史,二十世紀60年代末、70年代初人們致力于研究基因的體外分離技術,Korana于1971年最早提出核酸體外擴增的設想:"經過DNA變性,與合適的引物雜交,用DNA聚合酶延伸引物,并不斷重復該過程便可克隆tRNA基因"。
  
  PCR技術的本質是體外核酸擴增,加熱使雙鏈DNA解開螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復“變性→退火→引物延伸”過程至25~40個循環,呈指數級擴大待測樣本中的核酸拷貝數。
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